Skip to content

Messenger RNA dla FOXP3 w moczu od biorców nerkowych ad

3 tygodnie ago

468 words

Opracowaliśmy kinetyczny, ilościowy test PCR i wykazaliśmy, że poziomy mRNA FOXP3 w komórkach układu moczowego przewidują odwracalność ostrego odrzucenia i identyfikują pacjentów z wysokim ryzykiem utraty przeszczepu po epizodzie ostrego odrzucenia. Metody
Kohorty badania
Zbadaliśmy próbki moczu od 83 biorców przeszczepionych nerki. W tej grupie było 36 osób z dysfunkcją przeszczepu (średni poziom [. SD] kreatyniny, 3,6 . 2,4 mg na decylitr [318,2 . 212,2 .mol na litr]) i potwierdzone biopsją ostre odrzucenie (średni wiek, 41 . 12 lat, 15 mężczyzn i 21 kobiet, 13 białych, 12 czarnych i 11 z innym pochodzeniem rasowym lub etnicznym, z 20 żywymi i 16 zmarłymi dawcami), 29 osobników ze stabilną funkcją aloprzeszczepu (średni poziom kreatyniny, 1,4 . 0,4 mg na decylitr [123,8 . 35,4 .mol na litr]) i normalnej biopsji aloprzeszczepu (średni wiek, 44 . 14 lat, 15 mężczyzn i 14 kobiet, 12 białych, 4 czarne i 13 z innymi grupami rasowymi lub etnicznymi, z 26 żywymi i 3 zmarłymi dawcami) i 18 osób z dysfunkcją alloprzeszczepu (średni poziom kreatyniny, 3,1 . 1,6 mg na decylitr [274,0 . 141,4 .mol na litr]) i biopsje sklasyfikowane jako wskazujące na przewlekłą nefropatię aloprzeszczepową (średni wiek, 52 . 12 lat; 9 mężczyzn i 9 kobiet; 9 białych, 2 czarny i 7 z innym pochodzeniem rasowym lub etnicznym, z 5 żywymi i 13 zmarłymi dawcami).
Siedemdziesiąt pięć z 83 próbek moczu pobrano przed procedurą biopsji, a po zabiegu otrzymano 8 próbek. Próbki biopsyjne nerki utrwalone w formalinie, zatopione w parafinie, zostały zabarwione hematoksyliną i eozyną, kwasem nadjodowym Schiffem i trichromią Massona i zostały ocenione przy użyciu klasyfikacji Banff 9724 przez patologa, który był zaślepiony wynikami badań molekularnych. . Immunosupresja składała się z reżimu opartego na inhibitorach kalcyneuryny (cyklosporyna lub takrolimus), z podawaniem glukokortykoidów, przeciwciał antyfosfocytowych (muromonab-CD3 [OKT3] lub globuliny antytocytowej) lub obu w leczeniu ostrego odrzucenia.11 Badanie zostało zatwierdzone przez instytucjonalna komisja rewizyjna w Weill Medical College of Cornell University w Nowym Jorku i każdy pacjent wyraził pisemną zgodę.
Oznaczanie ilościowe mRNA metodą kinetyczną, ilościowa PCR
Całkowity RNA wyizolowano z peletek z komórek moczowych, oznaczono ilościowo i poddano odwrotnej transkrypcji do komplementarnego DNA (cDNA) .11 Zaprojektowaliśmy i zsyntetyzowaliśmy startery oligonukleotydowe i fluorogenne sondy do pomiaru poziomów mRNA FOXP3, CD25, CD3., perforyny i 18S rybosomalnego RNA (rRNA) (Tabela w dodatkowym dodatku, dostępna wraz z pełnym tekstem tego artykułu na stronie www.nejm.org). Analizę PCR przeprowadzono w dwuetapowym procesie, etapie wstępnej amplifikacji, a następnie pomiaru mRNA za pomocą systemu ABI Prism 7700 (protokół PCR jest podany w dodatkowym dodatku). Poziomy transkryptu obliczono za pomocą metody standardowej krzywej, 12 i liczby kopii mRNA znormalizowano przy użyciu numerów kopii 18S rRNA (liczba kopii mRNA w .g RNA podzielona przez liczbę kopii 18S rRNA w fg RNA) . Gdy nie znaleziono wykrywalnego poziomu transkryptu, przypisano wartość równą połowie minimalnego obserwowanego poziomu znormalizowanego 18S
[patrz też: rezonans magnetyczny kolana warszawa, przychodnia zielona góra, wykaz alergenów ]
[hasła pokrewne: przychodnia zielona góra, płatki teff, wykaz alergenów ]